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本实验依据GB 31658.17-2021《动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》，使用PolyPlus HLB-2小柱在ASPE480免疫亲和固相萃取系统上运行净化方法，结合液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）进行了猪肉中多兽残的检测。

结果表明，在50 μg/kg的四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物，经过Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液、磷酸盐缓冲溶液提取，使用PolyPlus HLB-2小柱净化后，ASPE480仪器上运行净化方法多兽残的回收率均在60% ~ 110%。

实验部分

仪器、试剂与材料

主要仪器设备：

美高梅mgm官网ASPE480免疫亲和固相萃取系统、PerkinElmer QSight液相色谱串联质谱仪。

试剂材料：

甲醇、乙腈、乙酸乙酯、甲酸为色谱纯；

乙二胺四乙酸二钠·二水、柠檬酸·一水、磷酸氢二钠·十二水、磷酸二氢钠·二水、浓氨水、氢氧化钠为分析纯；

甲醇中32种磺胺类/喹诺酮类化合物混标，P/N：MSVL0415-100M；

四环素类混合标准品，P/N：MSVL0399-100M。

0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液：取磷酸二氢钠·二水7.8 g，用水溶解并稀释至1000 mL。

0.05 mol/L磷酸氢二钠溶液：取磷酸氢二钠·十二水17.9 g，用水溶解并稀释至1000 mL。

磷酸盐缓冲液：取0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液190 mL，用0.05 mol/L磷酸氢二钠溶液稀释至1000 mL。

1 mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠4 g，用水溶解并稀释至100 mL。

Mcllvaine-Na2EDTA缓冲溶液：取柠檬酸·一水12.9 g、磷酸氢二钠·十二水10.9 g、乙二胺四乙酸二钠·二水39.2 g，加水900 mL，用1 mol/L氢氧化钠溶液调pH至5.0 ± 0.2，用水稀释至1000 mL。

20%甲醇溶液：取甲醇20 mL，加水80 mL，混匀。

洗脱液：取甲醇150 mL，加乙酸乙酯150 mL、浓氨水6 mL，混匀。

复溶液：取水40 mL，加甲醇5 mL、乙腈5 mL、甲酸0.05 mL，混匀。

PolyPlus HLB-2小柱：200 mg/6 mL，P/N：CSS0147。

样品制备

样品提取

称取试样2 g，加Mcllvaine-Na2EDTA缓冲液16 mL，涡旋1 min，超声20 min，－2℃、10000 r/min离心5 min，收集上清液。残渣中加磷酸盐缓冲液16 mL，重复提取1次，合并2次提取液，混匀，－2℃、10000 r/min离心5 min，玻璃纤维滤纸过滤，取25mL滤液，备用。

样品净化

在ASPE480仪器上，编辑运行方法进行固相萃取小柱的净化；收集洗脱液，45℃水浴氮气缓慢吹干。具体方法如下：

图1. ASPE480仪器净化方法

基质混合标准工作溶液配制

取高浓度兽药混合标准溶液，用空白样品基质溶液稀释成50 ng/mL的基质混合标准工作溶液。

色谱条件

色谱柱：Kinetex F5，2.6 µm，3.0 × 50 mm ；

流动相：A 相- 2 mM醋酸铵（含0.1%甲酸），B 相-甲醇；

柱  温：35℃；

进样量：5 µL；

梯度洗脱见下表。

液相色谱梯度洗脱条件

质谱条件

离子源：ESI+；雾化气温度：220℃；电喷雾电压：4800 V；离子源温度：300℃；反吹气温度：100℃； 质谱接口温度：250℃；采集方式：多反应监测（MRM）。

32种多兽残质谱参数

注：本实验中所有标准物质都以第一组离子对作为定量离子对。

实验结果

ASPE480仪器检测猪肉加标回收实验结果（添加水平50 μg/kg，n = 3）

实验谱图

50 ng/mL标准工作溶液色谱图

50 ng/mL猪肉基质混合标准工作溶液色谱图

猪肉基质空白色谱图

50 μg/kg猪肉基质加标色谱图

结论

本实验使用ASPE480免疫亲和固相萃取系统编辑SPE净化方法，通过PolyPlus HLB-2小柱结合LC-MS/MS的方法对添加水平为50 μg/kg的猪肉样品进行了检测。结果表明，通过使用PolyPlus HLB-2小柱结合ASPE480免疫亲和固相萃取系统对猪肉进行净化，32种兽药回收率满足要求且变异系数小于10%。

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