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链霉素(Streptomycin,STR)是一种氨基糖苷类抗生素,如果使用不当或停药时间短,链霉素可能会超量残留于动物源食品中。食品中低浓度链霉素残留会引起过敏,损伤肠内有益菌群,而高浓度链霉素会引起耳和肾中毒,对过敏胎儿更为严重。过去链霉素残留一般采用气相色谱法测定,但此方法昂贵又费时,本试剂盒是应用ELISA技术研发的药物残留检测产品,与仪器分析技术相比具有快速、简便、准确和灵敏度高等优点,操作时间需45分钟,能减少工作强度和操作误差。
1、将所需试剂从冷藏环境中取出,置于室温(20~25℃)平衡30min以上,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、取出需要数量的微孔板,将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封,保存于2~8℃。切勿冷冻。
3、洗涤液在使用前也需回温。
4、编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5、加标准品/样本:加入标准品或样本100µL/孔到对应的微孔中,再加入链霉素酶标物50µL/孔,再加入链霉素抗试剂50µL/孔轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置于25℃避光环境中反应30min。
6、洗板:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用洗涤液250µL/孔,充分洗涤4~5次,每次间隔10s,在吸水纸上拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)。
7、显色:加入底物液A液50µL/孔,再加入底物液B液50µL/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置于25℃避光环境中反应15min。
8、测定:加入终止液50µL/孔,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于450nm处(建议用双波长450/630nm检测,请在5min内读完数据),测定每孔OD值(若无酶标仪,则不加终止液用目测法可进行判定)。