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近期，美高梅mgm官网推出智能水体微生物采集系统，并与行业标准WS/T799-2022《污水中新型冠状病毒富集浓缩和核酸检测方法标准》进行了实验过程和实验结果的比较。聚乙二醇沉淀法、铝盐混凝沉淀法富集浓缩实验，按照标准WS/T799-2022中试剂材料、操作步骤执行。美高梅mgm官网智能水体微生物采集系统（以下简称“美高梅超滤法”）按照说明书执行。

材料与方法

材料：

智能水体微生物采集仪、高速冷冻离心机、生物安全柜、超滤浓缩管（0.01μm）、过滤袋、移液器及吸头、超滤浓缩管洗液、MS2过程控制试剂盒（RT－PCR探针法－50°C）。

方法：

预处理：取不同浑浊程度的污水样本，添加MS2混匀。样本进行4℃、5000g、30min或倒入过滤袋进行预处理，两方法均保留上清液，待用。

浓缩富集：

聚乙二醇沉淀法和铝盐混凝沉淀法按照标准WS/T799-2022进行富集浓缩，得到水样浓缩液，于0-4℃条件下保存，并于24h内进行核酸提取和荧光定量检测。

美高梅超滤法使用智能水体微生物采集系统用超滤浓缩管进行富集，富集后使用4mL超滤浓缩管洗液进行洗脱，得到水样浓缩液，于0-4℃条件下保存，并于24h内进行核酸提取和荧光定量检测。

实验过程

聚乙二醇沉淀法的实验步骤为预离心-二次离心-富集浓缩，需要使用高速冷冻离心机等昂贵设备，且多次离心、操作繁琐，样本处理时间为3.5-4h。铝盐混凝沉淀法的实验步骤为预离心-富集浓缩，实验准备时需要配置多种试剂，需要络合溶解，样本处理时间为2h。

美高梅超滤法实验步骤为预处理-浓缩-洗脱。高速离心、预处理2种方法均可满足前处理，且无需使用及配置大量试剂，样本处理时间为3-5min/100mL。综上，从操作便捷性及所需时间来看，美高梅超滤法显著优于聚乙二醇沉淀法、铝盐混凝沉淀法。

实验结果

✦注：数据来源于实验室，实际情况可能因样本或操作等情况导致不同。

聚乙二醇沉淀法取3份35mL污水样本，低浑浊回收率为5%±4%。铝盐混凝沉淀法取100mL样本污水样本，低浑浊回收率为16%±8%。美高梅方法取100mL样本污水样本，低浑浊回收率为70%±15%。

从表中可以看出，污水样本越浑浊，回收率越低，其中聚乙二醇沉淀法高浑浊污水样本回收率为ND。美高梅超滤法回收率显著优于聚乙二醇、铝盐混凝沉淀法。美高梅超滤法也可增大采样体积，进而提高检出率。

讨论

美高梅智能水体微生物采集系统可满足污水中新型冠状病毒富集浓缩。美高梅智能水体微生物采集仪可满足大体积样本的浓缩需求，随样本量体积的增加，可提高病毒阳性率的检出率。同时富集得到的病毒浓度大，更利于测序后续检测。

不同病毒富集方法回收率样本间差异大。可通过添加外源性内参，如噬菌体MS2、牛冠状病毒疫苗、灭活鼠肝炎病毒等，来评估病毒富集回收率。

部分浑浊度较高的污水样本提取后对反应体系有抑制，可能干扰PCR反应。建议同时对原液样本、10^-1稀释样本进行检测，根据实验室试验结果，10倍稀释样本可有效减少抑制干扰。对于回收率的计算方法，建议参照GB4789.42诺如病毒检验中外加扩增控制，进行计算。