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本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔上预包被地西泮抗原，样本中残留的地西泮和此抗原竞争地西泮的抗体（抗试剂），加入酶标二抗（酶标物）后，经TMB底物显色，样本吸光值与其所含地西泮的含量呈负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中地西泮的含量。 

适用范围

可定性、定量检测生鲜乳样本中地西泮的含量。

1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25°C）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。 

2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于2～8°C。切勿冷冻。 

3、洗涤液在使用前也需回温。 

4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。 

5、加标准品/样本：加入标准品/样本50μL，到对应的微孔中，然后加入地西泮抗试剂50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25°C避光环境中反应30min。 

6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤液250  μL/孔，充分洗涤4～5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。

7、加酶标物：加入地西泮酶标物100μL/孔，轻轻振荡混匀，    用盖板膜盖板后置25°C避光环境中反应15min，取出重复    步骤6。 

8、显色：加入底物液A液50μL/孔，再加入底物液B液50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25°C避光环境中反应15min。 

9、测定：加入终止液50μL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据），测定每孔OD值(若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定)。 

结果判定 

请利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析（欢迎来电索取）。