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采用实时荧光PCR技术，针对李斯特菌属特异性基因设计引物和探针。PCR扩增过程中，与模板结合的探针被Taq酶分解产生荧光信号，荧光定量PCR仪根据检测到的荧光信号绘制出实时扩增曲线，从而实现李斯特菌属在核酸水平上的定性检测。

1、核酸提取        

1）取40μL增菌液于裂解液管中，98℃或沸水浴10min。

2）冷却至室温，吸取上清备用或者置于-20℃保存。

2、反应体系配置

从试剂盒中取出List预混液，充分融化，涡旋后短暂离心，然后将阴性对照、样品的DNA提取液、阳性对照各取5μL分别加入PCR管或PCR板中，盖好管盖或板膜，短暂离心，立即进行PCR扩增反应。

3、PCR扩增       

PCR管或PCR板置于PCR仪上，推荐反应程序设定如下：反应体系为25μL，在第二步每个循环60℃时检测荧光信号，检测通道选择CY5。

注：使用ABI系列PCR仪器，如果不添加ROX，“passive reference”和 “quencher”均选择“none”。